重组人乙酰胆碱受体α亚基的克隆及初步表达  

Clone and Expression of Recombinant Human Acetylcholine Receptor α Subunit

作　　者：王雅梅[1] 郭晨云[2] 霍青虹 李卓玉[2] 

机构地区：[1]首都医科大学实验中心,北京100054 [2]山西大学生物技术研究所,山西太原030006 [3]太原市食品集团公司,山西太原030031

出　　处：《山西大学学报（自然科学版）》2002年第4期347-349,共3页Journal of Shanxi University(Natural Science Edition)

基　　金：山西省自然科学基金 (No.2 0 0 110 2 7) ;山西省留学基金

摘　　要：为获得高表达的人乙酰胆碱受体 (human acetylcholine receptor,Ach R)α亚基蛋白 ,根据已知的乙酰胆碱受体α亚基序列 ,设计并合成了一对引物 ,以含乙酰胆碱受体α亚基 DNA的重组质粒 p UC- Ach R为模板 ,应用PCR技术 ,扩增乙酰碱受α亚基的片段。将该扩增片段与载体 p ET32 M分别用 Bam HI/ Hind III双酶切 ,然后在T4 DNA连接酶作用下 ,将乙酰胆碱受体α亚基片段插入载体 p ET32 M中 ,且与载体中的硫氧还蛋白 (约 14 k D)基因融合。重组质粒 p ET32 M- Ach R含 T7启动子 ,为 IPTG诱导型。经双酶切鉴定 ,序列测定及工程菌初步表达分析 ,表明获得了正确的重组质粒 p ET32 M- Ach R,且在大肠杆菌 BL2 1中有明显表达 ,硫氧还蛋白 -乙酰胆碱受体融合蛋白的分子量约 37k D,但主要以包涵体形式存在。In order to obtain recombinant human acetylcholine receptor(AchR) α subunit,the plasmid of pET32 M containing a fusion gene of thioredoxin was used as an expression vector. It was reported that thioredoxin could assistant folding of some recombinant proteins,resulting in their solubility.Therefore,the DNA fragment coding AchR α subunit was amplified by PCR with pUC AchR as template and then inserted into vector pET32 M to be pET32 M AchR. After idenfification and transformation, the engineered strain E.coli BL21/pET32 M AchR was expressed by the induction of IPTG. The fusion protein,thioredoxin AchR α subunit with the molecular weight of 37kD was detected by SDS PAGE analysis after sonication. Unfortunately,the product mainly forms as inclusion bodies.

关 键 词：重组人乙酰胆碱受体 Α亚基 ACHR pET32M 基因克隆 基因表达 包涵体 重组质粒 跨膜糖蛋白 

分 类 号：Q513.2[生物学—生物化学] Q78