信号肽酶复合体催化亚基SPC18敲除细胞系的建立与鉴定  

作　　者：张子豪 李慧 刘萌 曹涵钰 董宁征 

机构地区：[1]江苏省血液研究所,苏州大学医学部,江苏苏州215123 [2]苏州大学唐仲英血液学研究中心,江苏苏州215123

出　　处：《中国畜牧杂志》2019年第11期146-149,186,共5页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家自然科学基金项目（81570457）

摘　　要：信号肽酶复合体(SPC)通过水解切除信号肽调控蛋白分泌,实验旨在研究信号肽酶复合体催化亚基SPC18对细胞行为、蛋白分泌功能的影响,探究其在乳腺生物反应器中的应用。本研究在人胚肾细胞HEK293细胞中,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术使SPC18的2号外显子缺失碱基GGAAG,导致移码突变,建立SPC18敲除细胞系,检测SPC18缺失对细胞形态、细胞增殖和内源分泌蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌的影响。靶基因测序及SPC18蛋白检测显示,成功构建了SPC18敲除细胞系,细胞形态与野生型HEK293细胞无显著差异,但细胞增殖能力显著下降;SPC18缺失不影响内源性MMP9的表达,但蛋白分泌受到抑制。本研究建立了SPC18敲除细胞系,SPC18的缺失会影响SPC功能,为SPC在乳腺生物反应器中的应用提供了依据。

关 键 词：乳腺生物反应器 信号肽酶复合体 催化亚基SPC18 CRISPR-Cas9 HEK293 

分 类 号：S814[农业科学—畜牧学]