一种优化的猪卵泡颗粒细胞分离方法及验证  

A optimized method and its verification for isolation of porcine follicle granulosa cells

作　　者：曲小露 施振旦[2] 李辉[2] Qu Xiaolu

机构地区：[1]吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118 [2]江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良与繁育重点实验室,江苏南京210014

出　　处：《江苏农业科学》2019年第23期190-194,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31402080);江苏省自然科学基金(编号:BK20151365)

摘　　要：目前,进行体外研究的卵泡颗粒细胞主要通过抽取卵泡液的方式获得。而笔者前期研究发现,通过该方式获得的颗粒细胞贴壁率低且活力差。为解决该问题,在抽取方式的基础上采用FICOLL-Paque分离液对细胞进行进一步纯化,并通过CCK-8、WesternBlot、免疫荧光染色、QRT-PCR、ELISA等方法分别对纯化细胞的形态、增殖能力、激素分泌相关受体(FSHR、LHCGR)和基因(CYP19A1、CYP11A1、StAR)的表达及激素分泌情况进行检测。结果发现,经纯化的细胞贴壁能力、细胞形态和增殖能力明显改善,且各激素分泌相关基因都有表达;E2分泌量明显提高,而P4分泌明显降低。研究结果表明,经FICOLL-Paque分离液纯化后的猪卵泡颗粒细胞中黄体化的颗粒细胞被大部分清除,纯化后的细胞活力更好且更能体现出颗粒细胞的特性。

关 键 词：颗粒细胞 FICOLL-Paque 细胞增殖 孕酮 免疫荧光染色 FSH受体 

分 类 号：S828.3[农业科学—畜牧学]