慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度的筛选  

作　　者：冶昡青 郭寿清 乔自林[1,3] 刘振斌 

机构地区：[1]西北民族大学生物医学研究中心甘肃省动物细胞技术创新中心,甘肃兰州730030 [2]西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030 [3]西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃兰州730030

出　　处：《甘肃畜牧兽医》2020年第1期43-45,共3页Gansu Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：国家科技重大专项重大新药创制项目(2015ZX09102016);中央高校基本科研业务费专项资金(31920190004);教育部创新团队发展计划项目(IRT_17R88)。

摘　　要：目的:筛选出慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的感染复数(Multiplicity of infection,MOI)及嘌吟霉素浓度(Puromycin)。方法:CDH1干扰阴性对照慢病毒以MOI值0、1、10、100(TU number/cell)分别侵染MDCK细胞,72h后病毒感染效率达80%以上且细胞形态良好的对应MOI值为最佳MOI值。MDCK细胞中分别加入0~11μg/ml Puromycin,每1μg/ml设置一个浓度梯度,选择第4天细胞全部死亡的最低浓度为Puromycin的最佳浓度。结果:MOI值为100时,细胞荧光率为80%~90%,细胞形态良好,100确定为最佳MOI值。Puromycin浓度为7μg/ml,四天后MDCK细胞全部死亡,确定为最佳浓度。结论:确定了慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株建立中最佳的MOI值及嘌呤霉素浓度,为后续慢病毒介导沉默CDH1基因的MDCK细胞株的建立打下了重要基础。

关 键 词：MDCK细胞 CDH1基因 感染复数 嘌呤霉素 

分 类 号：Q813.1[生物学—生物工程]