桑树ISSR-PCR反应体系建立及优化  

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system for mulberry

作　　者：刘玲 唐仕成 郑丹[2] 柯皓天 吕银[2] Liu Ling

机构地区：[1]四川省丝绸工程技术研究中心,四川成都610031 [2]四川省丝绸科学研究院,四川成都610031

出　　处：《江苏农业科学》2020年第10期80-85,共6页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：四川省科技计划(编号:2019YJ0291)。

摘　　要：采用正交试验设计L16(45)对桑树ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、引物、Mg2+、dNTPs和rTaq酶5个因素及反应程序中变性时间、退火时间、延伸时间和循环数进行优化分析。结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为DNA模板>rTaq酶>Mg2+>引物>dNTPs。最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含25 ng/μL DNA模板1μL、10×PCR buffer 1μL、20μmol/L引物0.2μL、2.5 mmol/L Mg2+0.8μL、2.5 mmol/L dNTPs 1μL、5 U/μL rTaq 0.1μL。优化得到的反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性40 s,合适的退火温度退火45 s,72℃延伸90 s,40个循环;72℃延伸10 min,16℃保存。通过梯度PCR,确定引物ID37的退火温度为49.5℃。稳定性检测表明该体系能用于桑树ISSR分析。

关 键 词：桑树 正交试验设计 ISSR-PCR 反应体系优化 

分 类 号：S888.2[农业科学—特种经济动物饲养]