犬瘟热病毒融合蛋白的真核细胞表达及鉴定  

作　　者：白桂杰 张同存[1] 校海霞[2] 

机构地区：[1]天津科技大学生物工程学院,300457 [2]中国科学院天津工业生物技术研究所,300308

出　　处：《今日畜牧兽医》2020年第5期5-7,共3页

基　　金：国家重点研发计划“生物安全高效应对产品研发技术体系研究”专项中的“新发突发烈性传染病治疗抗体的研制与制备技术”项目(2018YFC1200603)。

摘　　要：目的:通过293T真核细胞表达犬瘟热病毒融合蛋白,并鉴定其抗原性。方法:利用PCR方法扩增犬瘟热病毒(Onderstepoort株)的融合蛋白胞外段,在C末端引入氨基酸突变和His标签,插入pFuse载体,构建重组质粒pFuse-CDV-sF-ecto。将重组质粒转染293T细胞,72~96h后收上清,通过镍离子亲和层析和凝胶层析纯化目的蛋白,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定sF-ecto蛋白抗原性。结果 :细胞上清先经His-TrapTM富集,而后用Superdex 200 10/300GL纯化,出峰体积为8.43 mL,由出峰位置判断表达的CDV-sF-ecto蛋白为多聚体。ELISA检测发现CDV-sF-ecto与商业化犬瘟热病毒单克隆抗体有较高反应值。本研究成功表达了犬瘟热病毒融合蛋白的胞外段,并证明该蛋白对犬瘟热病毒特异性单克隆抗体有较高的结合活性。

关 键 词：犬瘟热病毒 融合蛋白 抗原性 表达 ELISA 

分 类 号：S852.655[农业科学—基础兽医学]