利用同源重组构建Chordin、BMP6真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究  

作　　者：荣恒 李晶 柳楠[1] 张梦瑶 贺建宁[1] 

机构地区：[1]青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109 [2]曲阜市畜牧兽医技术服务中心,山东济宁273100

出　　处：《中国畜牧杂志》2020年第7期166-171,共6页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家绒毛用羊产业技术体系项目(CARS-39-05)。

摘　　要：实验旨在构建敖汉细毛羊Chordin、BMP6基因表达载体,以及将其单、共转染至成纤维细胞中,分析mRNA、蛋白表达量的变化并探究两基因间的相互作用。采集40日龄的胎羊皮肤组织样品,通过PCR反应扩增目的基因(Chordin、BMP6基因)片段,利用SoSo试剂盒将目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。鉴定正确后,将pcDNA3.1-Chordin和pcDNA3.1-BMP6转化至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞振荡培养。提取质粒,将构建好的质粒pcDNA3.1-Chordin、pcDNA3.1-BMP6单、共转染至成纤维细胞中。通过荧光定量PCR和Western Blot技术检测Chordin和BMP6转染后表达量的变化并探究两基因间的作用关系。结果表明:利用同源重组技术成功构建了Chordin、BMP6基因的表达载体,共转染成纤维细胞后Chordin基因的表达量明显升高且共转染组的表达量极显著高于单转染组,BMP6基因的表达量明显下降,且共转染组的表达量极显著低于单转染组。Chordin基因抑制了BMP6基因的表达,BMP6基因促进了Chordin基因的表达。

关 键 词：敖汉细毛羊 同源重组技术 成纤维细胞 RT-PCR Western Blot 

分 类 号：S826.2[农业科学—畜牧学]