禽DNA病毒三重PCR检测方法的建立  

作　　者：朱庆贺 苗艳 陈曦 王爽 杨旭东 王观悦 田秋丰 史同瑞 

机构地区：[1]黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑龙江齐齐哈尔161005

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2020年第16期80-82,94,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：黑龙江省应用技术研究与开发项目(czznkt2016-2)。

摘　　要：为了建立可以同时检测4型禽腺病毒(FAdV-4)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、禽痘病毒(FPV)的方法,试验参考GenBank上登录的FAdV-4、ILTV、FPV的基因序列保守片段分别设计引物,优化PCR扩增体系和扩增程序,建立针对以上三种病毒的三重PCR检测方法,并考察方法的特异性、敏感性及对临床样品检测的准确性。结果表明:最终确定三重PCR最佳扩增体系(50μL)为,FADV-4、ILTV、FPV DNA各5μL,10×Buffer 5μL,dNTP Mix10μL,Mg2+5μL,Taq3μL,引物ILTV-R 0.4μL,ILTV-F 0.4μL,FPV-F 0.8μL,FPV-R 0.8μL,FAdV-R 1.8μL,FAdV-F 1.8μL,ddH2O 6μL。三重PCR最佳扩增程序为95℃预变性5 min;95℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环;72℃终延伸10 min;4℃结束反应。所建立的检测方法只能扩增FAdV-4、ILTV、FPV,而不能扩增鸡马立克病毒(MDV)、减蛋综合征病毒(EDSV),特异性强;该方法对FAdV-4、ILTV、FPV的最低核酸检测量分别为3.01 pg、19.50 pg、25.70 pg,敏感性好;采用建立的三重PCR方法对黑龙江地区临床患病鸡样品进行检测,其扩增结果与单一PCR扩增结果一致,符合率100%。说明该方法快捷、敏感、特异性强,能够实现对FAdV-4、ILTV和FPV的快速鉴定。

关 键 词：4型禽腺病毒 传染性喉气管炎病毒 禽痘病毒 多重PCR DNA病毒 诊断 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学] S858.3[农业科学—兽医学]