敖汉细毛羊Noggin基因质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究  

作　　者：荣恒 张梦瑶 柳楠[1] 李晶 贺建宁[1] 

机构地区：[1]青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109 [2]曲阜市畜牧兽医技术服务中心,山东济宁273100

出　　处：《中国畜牧杂志》2020年第9期88-93,共6页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家绒毛用羊产业技术体系(CARS-39-05)。

摘　　要：本实验旨在构建敖汉细毛羊Noggin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Noggin基因mRNA及蛋白表达量的变化。实验以40日龄胎羊为研究对象,采集组织样品,通过PCR反应扩增目的基因片段,经切胶回收后连接到pEM-T1载体,构建pEM-T1-Noggin后转染到大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞,提取pEM-T1-Noggin后进行酶切鉴定。鉴定后符合标准即可构建pcDNA3.1-Noggin重组表达载体,转至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞振荡培养,将重组质粒pcDNA3.1-Noggin转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Noggin基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-Noggin表达载体构建成功,并成功瞬时转染成纤维细胞,转染组的mRNA及蛋白表达量均极显著高于对照组。本研究在细胞水平上验证了Noggin基因功能,为进一步在个体水平上研究Noggin基因功能奠定基础。

关 键 词：敖汉细毛羊 Noggin基因 成纤维细胞 转染 实时荧光定量PCR Western Blot 

分 类 号：S826.2[农业科学—畜牧学]