云红梨1号HY5基因原核表达载体的构建、表达和纯化  

Construction,expression and purification of HY5pgene prokaryotic expression vector of “Yunhongli No.1”

作　　者：苏俊 陈璐 马伟荣 杨谨[4] 黄兴龙 陈霞 舒群 Su Jun

机构地区：[1]云南农业科学研究院园艺作物研究所,云南昆明650205 [2]云南农业大学园林园艺学院,云南昆明650200 [3]云南省红河州经济作物技术推广站,云南红河654400 [4]云南省农业科学院经济作物研究所,云南昆明650205 [5]石林县经济作物站,云南石林652200

出　　处：《江苏农业科学》2020年第20期62-67,共6页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金地区科学基金(编号:31760562);国家重点研发计划(编号:2018YFD0201400);云南省重大科技专项(编号:2019ZG002);云南省科技计划(编号:2017FB062);云南省技术创新人才培养计划(编号:2015HB101);现代农业产业技术体系建设专项资金(编号:CARS-28-20)。

摘　　要：HY5为调控光形态建成的转录因子,调控花青素的生物合成与累积。通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体,旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础。将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,并对其进行诱导表达,通过谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果表明,重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确,表明重组质粒载体构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株,在BL21菌株中均有明显的目的条带,诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku;PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达。通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体,诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

关 键 词：HY5基因 云红梨1号 原核表达载体 诱导表达 纯化 

分 类 号：S661.201[农业科学—果树学]