牛轮状病毒VP4基因RT-qPCR检测方法的建立  

作　　者：拜小强 耿金静 白生菊 魏锁成[1,2] 李琼毅 

机构地区：[1]西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030 [2]西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃兰州730030

出　　处：《甘肃畜牧兽医》2020年第11期51-55,61,共6页Gansu Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金(31460684)。

摘　　要：旨在建立快速特异的牛轮状病毒(BRV)实时荧光定量PCR检测方法,用于病原初步筛查。首先以BRV VP4作为目的基因,通过查询Genbank设计合成引物,然后将扩增的VP4基因片段克隆至pMD 18-T载体中,构建重组质粒标准品,最后经优化反应条件,建立了最低检测量可达7.21 copies/μl的EvaGreen荧光定量检测方法。经验证,该方法特异性好,对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性;重复性较强,组内重复和组间重复变异系数分别为0.95%~1.12%和1.55%~2.18%。此外,利用该方法检测了21份ELISA阳性样本,测得阳性符合率为90.47%。本研究建立的BVR VP4 RT-qPCR检测方法特异、敏感、可重复,可用于病原的快速检测,为BRV临床诊断提供了一种高效、可靠的检测方法。

关 键 词：牛轮状病毒 VP4基因 实时荧光定量PCR 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]