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作 者:曹青 陈浩 李卓璇 高蒙 沈滟[1] 刘晨[2] CAO Qing;CHEN Hao;LI Zhuo-xuan;GAO Meng;SHEN Yan;LIU Chen(School of Basic Medical Sciences,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471000,China;Department of Medical Genetics,Nanjing Medical University,Nanjing 211166,China)
机构地区:[1]河南科技大学基础医学院,河南洛阳471000 [2]南京医科大学医学遗传学系,江苏南京211166
出 处:《生物技术》2020年第5期449-452,503,共5页Biotechnology
基 金:河南科技大学大学生训练计划(2020279,2020290);河南科技大学博士启动基金项目(曹青博士启动费,13480027);南京医科大学科技发展基金重点项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,2015NJMUZD002);江苏省高校自然科学研究面上项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,16KJB180020);江苏省自然科学基金-青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,BK20171053);国家自然科学基金-青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,81702747)。
摘 要:[目的]检测carm1.S在非洲爪蛙胚胎早期发育中的表达情况,分析其在不同物种中的同源性以及进化关系。[方法]将p CS2+carm1.S表达载体用EcoRⅠ酶切后纯化,T7 RNA聚合酶体外转录制备carm1.S的反义探针;收集非洲爪蛙不同发育时期的胚胎,原位杂交检测carm1.S在胚胎早期发育中的表达情况;蛋白序列比对分析carm1.S在非洲爪蛙、人、小鼠、斑马鱼和热带爪蛙中的同源性及进化关系。[结果]carm1.S在4-cell时期就有表达,原肠胚之前,carm1.S在动物极表达;神经胚期在神经板和神经管中特异表达;尾芽期在鳃弓、眼、脑、体节、轴下肌群和腹部血岛中表达。序列比对结果显示非洲爪蛙的carm1.S与人、小鼠、斑马鱼和热带爪蛙蛋白的同源性为83%、83%、82%、95%。[结论]carm1.S在不同发育时期表达部位不同,呈现动态表达,且在进化过程中高度保守。[Objective]To detect carm1.S expression during early embryogenesis of Xenopus laevis,analyze its homology and evolutionary relationship in different species.[Method]The p CS2+carm1.S expression vector was digested with EcoRⅠand purified,then using T7 RNA polymerase to transcribe carm1.S antisense probe in vitro;Embryos were collected at different developmental stages,and the expression patterns of carm1.S was detected by whole-mount in situ hybridization.Protein sequence alignment and evolutionary relationship analysis of carm1.S in Xenopus laevis,human,mouse,zebrafish and Xenopus tropicalis was performed.[Result]carm1.S was expressed in the 4-cell stage.Before gastrulation,carm1.S was expressed in the animal pole.At neurula,it is specifically expressed in the neural plate and neural tube.At tailbud stage,it is expressed in the branchial arches,eye,somite,brain,hypaxial muscles and ventral blood island.Protein sequence alignment show that the homology of carm1.S in human,mouse,zebrafish and Xenopus tropicalis was 83%,83%,82%,95%.[Conclusion]carm1.S was expressed in different regions at different developmental stages,presenting dynamic expression and it is highly conserved in evolution.
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