非洲猪瘟病毒MGF360蛋白原核表达质粒的构建及其蛋白表达与纯化  

作　　者：王孟月 黄玉欣 王彦伟 张素玲 吴芃 逄文强 田克恭 

机构地区：[1]国家兽用药品工程技术研究中心,河南洛阳471000

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2020年第23期94-97,共4页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：洛阳市重大科技专项。

摘　　要：为了提供有效的抗原蛋白用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的临床诊断及防控研究,试验对ASFV SY-18株的多基因家族(MGF360)中的9L^14L共计6条基因序列进行E.coli密码子优化,合成优化后的基因序列并克隆至pET28a质粒上,然后转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白。结果表明:MGF360蛋白的原核表达质粒构建正确,无点突变。MGF360蛋白的原核表达质粒成功转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经诱导表达的6个基因均能获得可溶性表达,出现分子质量约为40 ku的蛋白条带,与预测大小一致。经Western-blot检测,能与HRP标记的His标签单克隆抗体结合。说明试验成功构建了ASFV MGF360蛋白的原核表达质粒,并表达纯化出目的蛋白。

关 键 词：非洲猪瘟病毒(African swine fever virus ASFV) MGF360 密码子优化 原核表达 可溶性表达 纯化 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]