鸭疫里氏杆菌与鸭坦布苏病毒双重PCR方法的建立  

作　　者：董雯雯 张世栋 王春玲[1,2] 艾洪新 朱伟[3] 李峰 

机构地区：[1]山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室,山东济南250100 [2]山东省农业科学院家禽研究所,山东济南250100 [3]山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊261000

出　　处：《家禽科学》2021年第1期16-20,共5页Poultry Science

基　　金：山东省家禽疾病诊断与免疫重点实验室开放课题(SDPDI201808),可吸收聚乳酸防粘连膜用于来航鸡肌腱术后研究(横向)。

摘　　要：为建立一种能同时快速检测鸭疫里氏杆菌(RA)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)的PCR方法,根据NCBI公布的RA dnaB基因和DTMUV PrM基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度进行优化筛选。优化引物浓度组合为:RA引物0.5μmol/L,DTMUV引物为1μmol/L,最佳退火温度为53℃。特异性试验表明,该方法对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、番鸭细小病毒、I型鸭肝炎病毒、沙门氏菌、大肠杆菌的核酸扩增结果均为阴性,RA和DTMUV的检测结果为阳性。敏感性测定表明,该双重PCR方法最低能检出RA和DNAV-1的核酸量分别为6.7 pg和3.6 pg。本研究建立的检测方法检测实验室保存的8份临床病料,RA的阳性率为62.5%,DTMUV阳性率为37.5%。综上所述,建立的PCR方法特异性强、敏感性和稳定性良好,为RA和DTMUV的临床病料检测提供了技术支撑。

关 键 词：鸭疫里氏杆菌 鸭坦布苏病毒 双重PCR 应用 

分 类 号：S858.31[农业科学—临床兽医学]