利用同源重组技术构建Chordin基因载体及其在成纤维细胞中表达量的研究  

作　　者：刘开东[1,2] 荣恒 贺建宁[1] 张梦瑶 赵明 柳楠[1] 

机构地区：[1]青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109 [2]青岛市畜牧兽医研究所,山东青岛266000 [3]青岛市动物疫病预防控制中心,山东青岛266000

出　　处：《中国畜牧杂志》2021年第2期196-200,共5页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家绒毛用羊产业技术体系(CARS-39-05)。

摘　　要：本实验旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊Chordin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Chordin基因mRNA及蛋白表达量的变化。以40日龄的胎羊为研究对象,采集组织样品,参照Genbank中Chordin基因序列设计一对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增目的基因片段,利用SoSo试剂盒将目的片段连接至表达载体pcDNA3.1上。鉴定后符合标准即可将pcDNA3.1-Chordin重组表达载体转至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞振荡培养。经质粒提取后将重组质粒pcDNA3.1-Chordin转染至成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Chordin基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果表明:普通PCR反应产物经电泳检测后与目的基因大小一致,位于2874处,且条带单一无杂带;表达载体pcDNA3.1酶切效果良好,经电泳检测其大小位于5428 bp处,且条带单一无杂带;连接后经测序鉴定pcDNA3.1-Chordin表达载体无碱基突变,pcDNA3.1-Chordin表达载体构建成功;转染成纤维细胞后,经检测,转染组的mRNA以及蛋白表达量均极显著高于对照组。本实验成功构建了敖汉细毛羊Chordin基因的表达载体,并成功转染成纤维细胞且表达,为进一步对Chordin基因的功能研究奠定了基础。

关 键 词：敖汉细毛羊 同源重组技术 成纤维细胞 RT-PCR Western Blot 

分 类 号：S826.2[农业科学—畜牧学]