稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定  

作　　者：敖罗权 敖翔 郭韡 邢伟 胡雪停 李战 姚孟维 吴晓凤 徐祥 

机构地区：[1]陆军军医大学大坪医院,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,干细胞与再生医学科,重庆400042

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2020年第12期1095-1101,共7页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点研发计划(2018YFC1313400)。

摘　　要：目的构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能。方法以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养,ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1×10^(8)转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中,CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后,IL-2、IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加。结论稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞。

关 键 词：CD19 HELA细胞 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞 慢病毒 实体肿瘤 

分 类 号：S718.85[农业科学—林学] R392.12[医药卫生—免疫学]