4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究  

Comparison of Four Improved CTAB Methods for Extraction of DNA from Mature Leaves of Pomegranate

作　　者：谭小艳 马耀华 郝兆祥 TAN Xiaoyan;MA Yaohua;HAO Zhaoxiang

机构地区：[1]枣庄学院生命科学学院,山东枣庄277160 [2]枣庄市石榴研究中心,山东枣庄277300

出　　处：《中国南方果树》2021年第3期122-125,共4页South China Fruits

基　　金：山东省科技发展计划项目(2011GGA04012);国家林业公益性行业科研专项资助项目(201204402);国家林业局林木种苗工程资助项目[(2012)888号];枣庄市科学技术发展计划项目(201233-2)资助。

摘　　要：为研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法,根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量。结果表明,改良CTABⅣ法能从各个石榴品种的成熟叶片中提取出基因组DNA,琼脂糖电泳胶孔干净,无拖带,且DNA的纯度和完整性都较好,OD260 nm/OD280 nm的比值均为1.8~2.0,无降解现象,其质量、产量都高于其他改良CTAB法。ISSR-PCR扩增结果表明,此方法提取的基因组总DNA完全适于ISSR分析。其主要的步骤是:在石榴叶片的研磨中添加Vc、PVP等抗氧化物质,加入CTAB提取液后65℃水浴30 min后冷却至室温,离心条件为15℃、10 000 r/min、10 min, DNA粗提液用氯仿抽提3次,可获得高质量DNA。

关 键 词：石榴 成熟叶片 改良CTAB法 基因组DNA 提取 

分 类 号：S665.4[农业科学—果树学]