鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定  

Eukaryotic expression and identification of methyltransferase of duck Tembusu virus

作　　者：韩凯凯[1,2,3] 严若峰 刘青涛[1,2,3] 刘宇卓 李银[1,2,3] 赵冬敏[1,2,3] 黄欣梅[1,2,3] 杨婧 Han Kaikai

机构地区：[1]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014 [3]江苏大学生命科学学院,江苏镇江212013

出　　处：《江苏农业科学》2021年第15期147-150,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31502101);江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(20)3093]。

摘　　要：甲基转移酶(methyltransferase,MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达,并对其生物学功能进行鉴定,以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板,设计针对MTase的特异性引物,提取TMUV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板进行扩增,得到MTase的基因片段,然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中,构建重组质粒pCMV-Flag-MTase,提取去除内毒素的重组质粒,并转染至BHK-21细胞,通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达。结果显示,质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确,通过间接免疫荧光与Western Blot检测,重组质粒在BHK-21细胞内正常表达,表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性。

关 键 词：鸭坦布苏病毒 甲基转移酶 真核表达 

分 类 号：S852.657[农业科学—基础兽医学]