一氧化氮供体JS-K通过蛋白磷酸酶2A调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡  

Nitric oxide donor JS-K regulates phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B signaling pathway through protein phosphatase 2A to induce apoptosis in human hepatoma HepG2 cells

作　　者：徐静蕾 胡伊乐[1] 杨佳文 朱心雨 李静[1] 霍梦惠 刘玲[1] XU Jing-lei;HU Yi-le;YANG Jia-wen;ZHU Xin-yu;LI Jing;HUO Meng-hui;LIU Ling(School of Basic Medicine,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

机构地区：[1]河南科技大学基础医学院,河南洛阳471003

出　　处：《中国药理学与毒理学杂志》2021年第7期507-513,共7页Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology

基　　金：河南省科技攻关项目(202102310439)。

摘　　要：目的研究一氧化氮(NO)供体JS-K经蛋白磷酸酶2A(PP2A)调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法设立细胞对照组(二甲亚砜<0.01%)、JS-K 2.5,5.0和10.0μmol·L^(-1)组、LY294002(PI3K抑制剂)10μmol·L^(-1)组、冈田酸(OA)(PP2A抑制剂)1 nmol·L^(-1)组、2-(4-羧苯基)-4,4,5,5-四甲基咪唑烷-1-氧-3-氧化钾(羧基-PTIO)50μmol·L^(-1)组、JS-K10.0μmol·L^(-1)+LY294002 10μmol·L^(-1)组、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)组和JS-K 10.0μmol·L^(-1)+羧基-PTIO 50μmol·L^(-1)组,处理HepG2细胞24 h,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹法检测PP2A蛋白磷酸化水平及PI3K、Akt和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白磷酸化水平。结果DAPI染色结果显示,与细胞对照组相比,JS-K 2.5~10.0μmol·L^(-1)组、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY294002 10μmol·L^(-1)组、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)组和JS-K 10.0μmol·L^(-1)+羧基-PTIO50μmol·L^(-1)组具有细胞染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征的细胞数增加。与JS-K 10.0μmol·L^(-1)组相比,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY294002 10μmol·L^(-1)组凋亡特征的细胞数增加,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)组和JS-K 10.0μmol·L^(-1)+羧基-PTIO 50μmol·L^(-1)组凋亡特征的细胞数减少。流式结果显示,与细胞对照组相比,JS-K 2.5~10.0μmol·L^(-1)、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY294002 10μmol·L^(-1)组、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA1 nmol·L^(-1)组和JS-K 10.0μmol·L^(-1)+羧基-PTIO 50μmol·L^(-1)组细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。与JS-K10.0μmol·L^(-1)组相比,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY294002 10μmol·L^(-1)组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),JS-K10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)组、JS-K 10.0μmol·L^(-1)+羧基-PTIO 50μmol·L^(-1)组细胞凋亡率显著下降(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,OA 1 nmol·L^(-1)组PP2A蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),JS-K 2.5,5.0和10.0μmol·L^(-1)组、JS-OBJECTIVE To investigate the mechanism by which nitric oxide(NO)donor JS-K regulates phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B(PI3 K/Akt)signaling pathway iva protein phosphatase 2 A(PP2 A)to induce apoptosis in human hepatoma HepG2 cells.METHODS HepG2 cells were divided into cell control group(only an equal amount of dimethyl sulfoxide added at the final concentration<0.01%),JS-K 2.5,5.0 and 10.0μmol·L^(-1)group,LY294002(a PI3 K inhibitor)10μmol·L^(-1)group,okadaic acid(OA,a PP2 A inhibitor)1 nmol·L^(-1)group,carboxy-PTIO(a NO scavenger)50μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)combined with LY29400210μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)combined with OA 1 nmol·L^(-1)group,and JS-K 10.0μmol·L^(-1)combined with carboxy-PTIO 50μmol·L^(-1)group.HepG2 cells were treated for 24 h.DAPI staining was used to observe changes in cell morphology.Flow cytometry was used for cell apoptosis.Western blotting was used to detect the phosphorylation levels of PP2 A,PI3 K,Akt,and mTOR.RESULTS The results of DAPI staining indicated that the apoptotic cells with obvious morphology including chromatin condensation and nuclear fragmentation were increased in JS-K 2.5,5.0 and 10.0μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY29400210μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)group,and JS-K 10.0μmol·L^(-1)+carboxy-PTIO 50μmol·L^(-1)group compared with cell control group.Compared with JS-K 10.0μmol·L^(-1),the apoptotic cells with obvious morphology were significantly increased in JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY29400210μmol·L^(-1)group while the apoptotic cells of JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)group and JS-K 10.0μmol·L^(-1)+carboxy-PTIO50μmol·L^(-1)group were decreased.Meanwhile,the results of flow cytometry also indicated that JS-K could significantly increase the apoptosis rate of JS-K 2.5,5.0 and 10.0μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+LY29400210μmol·L^(-1)group,JS-K 10.0μmol·L^(-1)+OA 1 nmol·L^(-1)group,and JS-K 10.0μmol·L^(-1)+carboxy-PTIO 50μmol·L^(-1)group(P<0.01)comp

关 键 词：JS-K 肝细胞癌 NO供体 蛋白磷酸酶2A 细胞凋亡 

分 类 号：R966[医药卫生—药理学]