色素辣椒InDel-PCR反应体系优化及引物筛选  

Optimization and primer screening of InDel-PCR reaction system for pigment pepper

作　　者：李辉玲 董洁 张国儒 火顺利 叶远荣 杜珊珊 张建文 Li Huiling

机构地区：[1]巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院,新疆库尔勒841000 [2]新疆农业科学院园艺作物研究所,新疆乌鲁木齐830091

出　　处：《江苏农业科学》2021年第18期72-76,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：巴州财政支持基本科研业务经费(编号:202008、202104)。

摘　　要：为建立和优化色素辣椒的InDel标记PCR反应体系,筛选多态性良好且重复性高的引物,为InDel分子标记在色素辣椒辅助育种、品种纯度鉴定及遗传多样性分析等提供可靠的技术支持。采用正交试验、单因素试验方法,对影响扩增体系中的模板DNA用量、引物浓度、2×Taq PCR Mix添加量等参数进行3因素4水平的正交试验比较分析,对循环数进行单因素试验优化分析。结果表明,对InDel-PCR体系扩增结果的影响程度中引物浓度最大,其次是模板DNA用量,而2×Taq PCR Mix添加量的影响不大。根据检测结果,出于成本和模板DNA用量的考虑,确定最佳InDel-PCR反应体系(10μL):模板DNA用量为35 ng、引物浓度为0.5μmol/L、2×Taq PCR Mix添加量为5μL。扩增程序:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,退火30 s,72℃变性60 s,35个循环;72℃变性5 min;扩增产物在4℃保存。从240对InDel通用引物中最终筛选出14对适用于色素辣椒InDel-PCR候选引物。InDel标记是基于PCR的分子技术,选择适宜的引物及模板DNA浓度对扩增出清晰、稳定的条带很重要,优化后的10μL InDel-PCR反应体系及扩增程序,成功筛选出14条多态性较高的InDel引物,为后续的色素辣椒分子标记研究提供了可靠技术依据。

关 键 词：色素辣椒 InDel-PCR 反应体系 引物筛选 扩增产物 参数优化 

分 类 号：S641.303[农业科学—蔬菜学]