H9N2亚型禽流感病毒NS1蛋白原核表达载体的构建及表达  

Construction and expression of prokaryotic expression vector of H9N2 subtype avian influenza virus NS1 protein

作　　者：马平 杨婧[1] 刘宇卓[1] 李银[1] 黄欣梅[1] 赵冬敏[1] 韩凯凯[1] 章丽娇 刘青涛[1] Ma Ping

机构地区：[1]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014 [2]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095

出　　处：《江苏农业科学》2022年第1期40-44,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金面上项目(编号:31972691)。

摘　　要：为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定。结果显示,本试验成功扩增出H9N2 AIVs的NS1基因,并筛选到保真克隆;带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,其中,IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大,并且表达产物主要存在于包涵体中;纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别,利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白,说明重组蛋白具有良好的免疫原性,该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础。

关 键 词：禽流感病毒 NS1蛋白 原核表达 蛋白纯化 蛋白免疫印迹 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]