促大鼠毛囊干细胞增殖的实验研究  

Experimental study on promoting the proliferation of rat hair follicle stem cells

作　　者：林博杰[1] 冷静[2] 黄丹[1] 严玉勇 林冠宇 Lin Bojie;Leng Jing;Huang Dan;Yan Yuyong;Lin Guanyu(Department of Plastic and Aesthetic Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China;Guangxi University of Chinese Medicine Guangxi Key Laboratory of Translational Medicine for Treating High-Incidence Infectious Diseases with Integrative Medicine,Nanning 530200,China)

机构地区：[1]广西医科大学第一附属医院整形美容外科,南宁530021 [2]广西中医药大学广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室,南宁530200

出　　处：《中华实验外科杂志》2022年第1期173-173,共1页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：广西科技计划项目(桂科AA17292008);广西自然科学基金(2018GXNSFBA050025、2020GXNSFAA238005);广西研究生教育创新计划项目(JGY2020047)。

摘　　要：本研究旨在探讨富含亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5(leucine-rich repeat-ontaining G protein coupled receptor5,Lgr5)基因转染是否可促进毛囊干细胞增殖。一、材料与方法1.材料:1周龄SD雄性大鼠1只,清洁级,体重12 g,购自上海凯学生物科技有限公司,许可证号为SCXK(沪)2019-0004。本研究经广西医科大学第一附属医院医学伦理委员会审批(2021-KY-213)。2.方法:常规进行毛囊干细胞分离、培养。将处于对数生长期的毛囊干细胞按照1×105个/ml密度接种于96孔培养板中。空载组转染pGC-FU-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)空载质粒,实验组转染携带pGC-FU-Lgr5-EGFP质粒,对照组不予特殊处理,各5个复孔。转染后48 h用胰蛋白酶消化,在含有G418的选择性培养基中加压筛选,6周后选取阳性细胞克隆即为稳定表达株。采用实时-反转录聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测培养48 h后Lgr5 mRNA表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Lgr5蛋白表达。另采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法和5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EDU)试剂盒检测增殖活性。

关 键 词：医学伦理委员会 毛囊干细胞 胰蛋白酶消化 反转录聚合酶链反应 增强型绿色荧光蛋白 乙炔基 选择性培养基 蛋白质印迹法 

分 类 号：R329.2[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]