三色散干预滑膜巨噬细胞焦亡影响背根神经节TRPA1治疗KOA疼痛的离体研究  

作　　者：杨楠 廖太阳 张力[1] 张皞晟 李晓辰[1] 王培民[1] 张农山[1] 

机构地区：[1]南京中医药大学附属医院江苏省中医院,江苏南京210029

出　　处：《时珍国医国药》2022年第1期33-38,共6页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(81774334);江苏省中医药领军人才项目(SLJ0207);江苏省中医药科技发展专项(2020ZX12)。

摘　　要：目的探讨滑膜巨噬细胞焦亡对背根神经节神经元细胞(DRG)膜上瞬时受体电位TRPA1的影响及三色散的干预作用。方法提取ICR小鼠滑膜巨噬细胞,用1μg/mL的脂多糖(LPS)以模拟KOA的炎症微环境;采用CCK-8法检测三色散水提物冻干粉对滑膜巨噬细胞的增殖活性,确定对细胞无毒性的干预浓度;滑膜巨噬细胞分组为正常组、LPS组、三色散组,Western blot法检测滑膜巨噬细胞焦亡相关NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达;qRT-PCR检测滑膜巨噬细胞NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18基因表达;ELISA检测炎症细胞因子(IL-1β和IL-18)水平;提取ICR小鼠DRG细胞,将上述三组细胞上清加入DRG细胞中,另增设一组加入LPS及TRPA1抑制剂,DRG分组为正常上清干预组(A组)、LPS上清干预组(B组)、三色散上清干预组(C组),LPS+TRPA1抑制剂组(D组);βⅢ-tubulin及GFAP免疫荧光鉴定提取的DRG神经元细胞;Western blot法及qRT-PCR检测TRPA1蛋白及基因表达;ELISA检测疼痛因子(CGRP和SP)水平;实时荧光钙成像观察各组DRG神经元细胞钙离子内流情况。结果确定100μg/mL三色散水提冻干粉对滑膜巨噬细胞无明显细胞毒性;LPS组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著高于正常组,低于三色散组(P<0.05);LPS组NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18基因表达显著高于正常组,低于三色散组(P<0.05);LPS组细胞上清中IL-1β和IL-18表达量显著高于正常组,低于三色散组(P<0.05);βⅢ-tubulin及GFAP免疫荧光显示提取的DRG神经元细胞胞体呈圆形或椭圆形,可见神经元之间的轴突呈大量增加,形成稀疏网络状结构;三色散水提冻干粉干预后可抑制B组瞬时受体电位TRPA1蛋白及基因表达水平的上升(P<0.05),降低B组细胞上清中CGRP和SP表达量;实时荧光钙成像分别观察20、40和60 s的荧光强度发现:B组荧光强度较A组增加(P<0.05),C组及D组荧光强度较B组降低(P<0.05)。结论滑膜巨噬细胞焦亡激活DRG膜上TRPA1离子通道

关 键 词：焦亡 瞬时受体电位TRPA1 三色散 背根神经节 疼痛 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]