多重连接探针扩增结合熔解曲线法鉴别南、北板蓝根掺杂  

Identification of inter-species adulteration of Baphicacanthis cusiae Rhizoma et Radix and Isatidis Radix by multiplex ligation-dependent probe amplification combined with melting curve analysis

作　　者：李小芳 王文斌 莫静 定天明 谢云 汪波 LI Xiao-fang;WANG Wen-bin;MO Jing;DING Tian-ming;XIE Yun;WANG Bo(College of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China;School of Life Sciences,Hubei University,Wuhan 430062,China;State Drug Administration Key Laboratory for Quality Control of Traditional Chinese Medicine,Hubei Provincial Institute for Drug Control,Wuhan 430075,China)

机构地区：[1]湖北中医药大学药学院,湖北武汉430065 [2]湖北大学生命科学学院,湖北武汉430062 [3]湖北省药品监督检验研究院,国家药品监督管理局中药质量控制重点实验室,湖北武汉430075

出　　处：《中成药》2022年第4期1204-1208,共5页Chinese Traditional Patent Medicine

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81973429);湖北省科技重大专项(2020ACA007);湖北省自然科学基金重点类项目(2020CFA024)。

摘　　要：目的 针对南、北板蓝根在市场流通和中医临床用药中混用现象,建立多重连接探针扩增结合熔解曲线法来快速准确地鉴别两者。方法 针对南、北板蓝根ITS2序列设计两对特异性探针,通过DNA变性、杂交、连接、扩增和进行熔解程序建立MLPA-熔解曲线,根据T_(m)值的差异进行鉴别,并对其探针特异性和检测灵敏度进行考察。结果 在特异性试验中,南板蓝根产生84.98℃的熔解曲线峰,北板蓝根产生83.35℃的熔解曲线峰;在灵敏度试验中,南板蓝根中掺杂10%的北板蓝根或北板蓝根中掺杂5%的南板蓝根均可被检出。26批商品药材中,有12批熔解曲线峰与北板蓝根相符,14批熔解曲线峰与南板蓝根吻合,与测序结果一致。结论 该方法灵敏准确,特异性强,可为南、北板蓝根的鉴别提供支持。

关 键 词：南板蓝根 北板蓝根 多重连接探针扩增技术 熔解曲线 ITS2 

分 类 号：R282􀆰[医药卫生—中药学]