DKK2基因质粒的构建及其在敖汉细毛羊成纤维细胞中表达量的研究  

作　　者：王雷[1] 刘猛 荣恒 柳楠[1] 贺建宁[1] 

机构地区：[1]青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109 [2]临沂市兰山区畜牧发展促进中心,山东临沂276600

出　　处：《中国畜牧杂志》2022年第5期131-136,共6页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：财政部、农业农村部:国家绒毛用羊产业技术体系(CARS-39-05);山东省自然科学基金(ZR2020MC167);山东省农业良种工程(2019LZGC012)。

摘　　要：本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化。采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品,首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计,通过PCR反应对DKK2基因进行扩增,并与pGM-T载体进行连接反应,构建了pGM-T-DKK2重组质粒;将克隆载体转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,进行目的片段的克隆;鉴定正确后构建pcDNA3.1-DKK2重组质粒;并将pcDNA3.1-DKK2重组质粒转染敖汉细毛羊成纤维细胞,检测过表达载体对成纤维细胞DKK2基因的表达水平变化。酶切、测序鉴定结果显示,成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并且转染敖汉细毛羊成纤维细胞后DKK2基因实验组的表达量极显著高于对照组;Western Blot实验结果显示,实验组的蛋白表达水平极显著高于对照组。本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并成功转染了敖汉细毛羊成纤维细胞,为进一步研究DKK2基因的功能奠定了基础。

关 键 词：敖汉细毛羊 DKK2基因 过表达 成纤维细胞 

分 类 号：S826.2[农业科学—畜牧学]