沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用  

Establishment and application of duplex nested reverse transcription-polymerase chain reaction for detection of grapevine rupestris stem pitting-associated virus

作　　者：胡国君[1] 张尊平[1] 范旭东[1] 任芳[1] 翟秀丽 时晓燕 董雅凤[1] HU Guojun;ZHANG Zunping;FAN Xudong;REN Fang;ZHAI Xiuli;SHI Xiaoyan;DONG Yafeng

机构地区：[1]中国农业科学院果树研究所,国家落叶果树脱毒中心,辽宁兴城125100 [2]赤峰市森林草原保护发展中心

出　　处：《中国果树》2022年第8期39-43,共5页China Fruits

基　　金：财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助;中国农业科学院科技创新工程资助。

摘　　要：根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。

关 键 词：葡萄 沙地葡萄茎痘伴随病毒 巢式RT-PCR 双重巢式RT-PCR 

分 类 号：S436.631.19[农业科学—农业昆虫与害虫防治]