杨梅素通过抑制能量代谢促进5-氟尿嘧啶对人食管癌细胞EC109的抗肿瘤作用  

Myricetin enhances anti-tumor effect of 5-fluorouracil on human esophageal cancer cell line EC109 by inhibiting energy metabolism

作　　者：苏楠[1] 范霞霞 谢娇娇 李亚飞[2] 马永成[2] SU Nan;FAN Xia-xia;XIE Jiao-jiao;LI Ya-fei;MA Yong-cheng(College of Food and Biological Engineering,Henan University of Animal Husbandry and Economy,Zhengzhou 450011,China;Department of Pharmacy,Centeral China Fuwai Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 451464,China)

机构地区：[1]河南牧业经济学院食品与生物工程学院,河南郑州450011 [2]郑州大学华中阜外医院药学部临床药理实验室,河南郑州451464

出　　处：《中国药理学与毒理学杂志》2022年第6期451-458,共8页Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology

基　　金：河南省高等学校重点科研项目(21A330002);2022年度全国大学生生命科学竞赛项目(66669);河南省医学科技攻关计划项目(2018020462)。

摘　　要：目的研究杨梅素(MYR)对5-氟尿嘧啶(5-FU)抗肿瘤作用的促进效应,并探讨其潜在机制。方法①人食管癌细胞EC109分别设立细胞对照组、MYR 4.68~300.00μmol·L^(-1)组、5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)组和5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1)组,分别孵育24,48和72 h,采用MTT法检测细胞存活抑制率。②EC109细胞分为细胞对照、MYR 75μmol·L^(-1)、5-FU 12μmol·L^(-1)和MYR+5-FU组,孵育48 h,荧光显微镜观察线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测细胞凋亡率、MMP和葡萄糖摄取。③细胞分组为细胞对照组、MYR 75,100和200μmol·L^(-1)组、5-FU 12μmol·L^(-1)组及MYR 75μmol·L^(-1)+5-FU 12μmol·L^(-1)组。细胞能量代谢分析仪每隔5 min实时检测细胞氧消耗速率(OCR)和胞外酸化率(ECAR),检测150 min。结果①MYR 75~300μmol·L^(-1)浓度范围内作用48和72 h,均可显著抑制EC109细胞存活(P<0.01);5-FU 3~48μmol·L^(-1)浓度范围内作用48和72 h,均能抑制食管癌细胞EC109存活(P<0.01);5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1)组作用48和72 h时,MYR 75μmol·L^(-1)表现出对5-FU的增敏作用,当作用24 h时,MYR则对5-FU表现出拮抗作用。②与细胞对照组相比,MYR 75μmol·L^(-1),5-FU 12μmol·L^(-1)和MYR+5-FU作用EC109细胞48 h,细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);与单用组相比,联用组细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。MYR 75μmol·L^(-1)组和5-FU 12μmol·L^(-1)组MMP显著下降(P<0.05);与单用药组相比,联用组MMP显著下降(P<0.01);葡萄糖摄取结果显示,与细胞对照组相比,MYR 75μmol·L^(-1)组细胞葡萄糖摄取显著下降(P<0.01),而5-FU 12μmol·L^(-1)组无明显变化;与单用药组相比,联用组可显著抑制葡萄糖摄取(P<0.01)。③能量分析结果显示,MYR 75,100和200μmol·L^(-1)组OCR和ECAR显著降低(P<0.05);5-FU 12μmol·L^(-1)组细胞OCR显著降低(P<0.05),而ECAR有所升高(P<0.05);与单用药组相比,联用组OCR进一步下降(P<0.05),ECAR无明显变化。结论MYR可促进5-FU对EC10OBJECTIVE To investigate the sensitization effect of myricetin(MYR)on the antitumor properties of 5-fluorouracil(5-FU)and the potential mechanism.METHODS①Human esophageal cancer cells EC109 were randomly divided into four groups:cell control,MYR 4.68~300.00μmol·L^(-1),5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1) and 5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1) groups.EC109 cells were treated in these four groups for 24,48 and 72 h.MTT assay was performed to measure the effect of MYR,5-FU and their combination on the growth of EC109.②EC109 cells were divided into the cell control,MYR 75μmol·L^(-1),5-FU 12μmol·L^(-1) and 5-FU 12μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1) groups.After EC109 cells were treated for 48 h,the mitochondrial membrane potential(MMP)was observed under a fluorescence microscope.The apoptotic rate,MMP and glucose uptake of cells were analyzed by flow cytometry.③EC109 cells were divided into the cell control,MYR 75,100 and 200μmol·L^(-1),5-FU 12μmol·L^(-1) and 5-FU 12μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1) groups.Changes in OCR and ECAR were monitored every five min for 150 min by a Seahorse XFp extracellular flux analyzer in real time.RESULTS①At 48 and 72 h,MYR in the concentration range of 75~300μmol·L^(-1) and 5-FU in the concentration range of 3~48μmol·L^(-1) significantly inhibited the growth of EC109 cells(P<0.01).At 48 and 72 h,MYR 75μmol·L^(-1) showed sensitization to 5-Fu,but at 24 h,MYR 75μmol·L^(-1) had antagonistic effect on 5-FU.②Compared with the cell control group,the apoptotic rates of EC109 cell in MYR 75μmol·L^(-1),5-FU 12μmol·L^(-1) and MYR+5-FU groups were significantly increased(P<0.01).Compared with the single drug group,the apoptotic rate of the combined treatment group was significantly higher(P<0.01).MYR 75μmol·L^(-1) and 5-FU 12μmol·L^(-1) significantly reduced the MMP of EC109 cells.The MMP of EC109 treated with 5-FU 12μmol·L^(-1) combined with MYR 75μmol·L^(-1) was decreased markedly,and the difference was significant compared with the single drug group(P<0.

关 键 词：杨梅素 5-氟尿嘧啶 线粒体 能量代谢 EC109 人食管癌 

分 类 号：R979.1[医药卫生—药品]