腐败梭菌α毒素蛋白单克隆抗体制备  

作　　者：林静 苗润春 韩四娥 贾青燕 伏刚 冉智光 杨晓雪 李明勇 柴同杰[1] 韦良孟[1] 

机构地区：[1]山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018 [2]金宇保灵生物药品有限公司,内蒙古呼和浩特 [3]青海生物药品厂有限公司,青海西宁 [4]重庆澳龙生物制品有限公司,重庆 [5]山东省动物疫病预防与控制中心/山东人畜共患病流调监测中心,山东济南 [6]青岛康大佳牧畜禽良种繁育有限公司,山东青岛

出　　处：《山东畜牧兽医》2022年第11期5-9,共5页Shandong Journal of Animal Science and Veterinary Medicine

基　　金：科技部“十三五”国家重点研发计划重点专项课题“羊梭菌病诊断和检测新技术研究”(2016YFD0500905)。

摘　　要：将腐败梭菌参考株增殖、鉴定,使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然α毒素,并通过SDS-PAGE方法对其进行检测。将扩增的α毒素目的片段和经酶切的p ET-21a(+)载体同源重组,将构建好的重组质粒转入到BL21(DE3)感受态细胞中,并筛选阳性克隆株。在优化的表达条件下,对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达。免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞筛选。制备及纯化腹水,进行效价、浓度、纯度及特异性测定。结果表明,本研究成功表达了可溶性腐败梭菌α毒素蛋白,大小约为46 kDa,筛选出的单抗3 E8和单抗6B12对重组蛋白效价检测结果均为1:256 000,对天然α毒素的效价检测结果均为1:128 000;纯度均已达到85%以上;单克隆抗体的浓度分别为3E8:2.27 mg/ml,6B12:1.96 mg/ml;均能够与腐败梭菌重组α毒素、天然α毒素特异性结合,而与产气荚膜梭菌α毒素无交叉反应。结论:得到特异性强、稳定性高的单抗3E8和单抗6B12,有助于腐败梭菌病的早期诊断及研究。

关 键 词：腐败梭菌 Α毒素 原核表达 单克隆抗体 

分 类 号：S852.69[农业科学—基础兽医学]