鹅星状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备与鉴定  

Preparation and identification of monoclonal antibodies against spike protein of goose astrovirus

作　　者：卢清侠[1] 李伟 金前跃[1] 郭振华[1] 冯丽丽 邢云瑞 柴书军[1] 邢广旭[1] 张改平[1] Lu Qingxia

机构地区：[1]河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002 [2]河南农业大学生命科学学院,河南郑州4500023 [3]河南省农业科学院农业经济与信息研究所,河南郑州450002

出　　处：《江苏农业科学》2022年第22期159-165,共7页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：中原英才计划(育才系列)-中原青年拔尖人才(编号:ZYYCYU202012148);河南省自然科学基金优秀青年科学基金(编号:222300420051);河南省农业科学院自主创新项目(编号:2022ZC67)。

摘　　要：为了制备鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)刺突(Spike)蛋白的单克隆抗体,并对获得的单克隆抗体的生物学特性进行鉴定,将大肠杆菌表达的截短Spike蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和单克隆抗体的筛选来获得阳性杂交瘤细胞,并进一步利用免疫印迹和间接免疫荧光技术进行单抗的鉴定;采用ELISA技术进行单克隆抗体亚型、抗体效价的测定;同时根据GAstV XX株Spike蛋白序列合成重叠的多肽库进行单抗识别的抗原表位鉴定。共获得3株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1A5、2B4、12E6;免疫印迹和间接免疫荧光实验显示3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的免疫反应,其中2B4、12E6可与GAstV发生反应;亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为IgG2b亚类,单抗1A5为IgG2a亚类;轻链均为κ链;敏感性结果显示,抗体效价都在1∶51 200以上;抗原表位的鉴定结果表明单抗1A5识别的抗原表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI,单抗2B4识别的抗原表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM。本研究成功制备了针对GAstV Spike蛋白的单克隆抗体,并鉴定出2个新的抗原表位,为建立快速、简便的GAstV检测方法奠定了基础。

关 键 词：鹅星状病毒 刺突蛋白 单克隆抗体 抗原表位 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]