绵羊NDRG1基因表达和干扰载体的构建及验证  

作　　者：龙德智 孙楠祯 郝科兴 陈慧慧 王静[1] 胡广东 

机构地区：[1]石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000

出　　处：《中国畜牧杂志》2022年第11期200-206,共7页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家自然科学基金(32060751);省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室开放课题(MYSKLKF201905);动物疾病防控兵团重点实验室开发课题(2020BTDJ05)。

摘　　要：为研究NDRG1基因在绵羊生长繁殖中的功能,本实验通过克隆NDRG1基因编码区并分别构建过表达和干扰载体,在细胞水平对其功能进行验证。利用RT-PCR扩增绵羊NDRG1基因CDs区,将其克隆至pcDNA3.1(+)载体构建重组表达载体,设计并构建针对NDRG1CDs区干扰载体,利用内切酶消化法对相关质粒进行鉴定。将构建成功的重组载体转染到HEK293T细胞中,分别利用RT-qPCR和Western Blot方法检测其mRNA和蛋白表达量,确认载体功能。结果显示,NDRG1基因克隆片段为1378 bp,与已发布预测的绵羊NDRG1基因进行比对显示在第1031核苷酸位点发生了G-A突变,氨基酸比对结果显示其同源性为100%。酶切鉴定结果显示,NDRG1表达载体和干扰载体构建成功。RT-qPCR与WesternBlot结果表明,构建的重组载体可介导NDRG1基因在HEK 293T细胞中极显著增高,构建的干扰载体可显著降低NDRG1基因表达水平,其中NDRG1-shRNA3干扰效果极显著且高达90%。本实验成功克隆绵羊NDRG1基因,构建针对该基因的表达载体和干扰载体,并在细胞水平验证其功能,为深入研究NDRG1基因在绵羊细胞中的功能提供基础。

关 键 词：NDRG1基因 表达载体 干扰载体 绵羊 

分 类 号：S826.2[农业科学—畜牧学]