基于ISRE报告基因系统的清肺口服液黄酮类化合物筛选与验证  

作　　者：孙亚磊 陶嘉磊 赵佩佩 朱城璧 袁斌 

机构地区：[1]南京中医药大学附属医院儿科,江苏南京210000

出　　处：《中成药》2022年第12期4053-4057,共5页Chinese Traditional Patent Medicine

基　　金：国家自然科学基金委员会面上项目(82174436,81873340);江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX22_1923)。

摘　　要：目的以干扰素激活反应元件(ISRE)启动子为靶点,建立受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,用以清肺口服液黄酮类化合物筛选,并对筛选结果予以验证。方法将高纯度ISRE荧光素酶报告基因质粒与海肾荧光质粒共同转染293T工具细胞,进行启动子活性检测。将ISRE报告基因质粒与病毒包装辅助质粒Helper 1.0、2.0共同转染工具细胞,收集慢病毒用于侵染A549细胞,经过药物筛选与RT-qPCR检测后得到稳定细胞株。利用稳定细胞株对清肺口服液中32个黄酮类化合物进行筛选,最后验证化合物对受ISRE正向调控的基因表达的影响。结果ISRE启动子活性良好,通过慢病毒转染成功,构建受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,并通过双荧光素酶检测予以功能确认。从32个黄酮类化合物筛选出6个能够促使ISRE表达的化合物。RT-qPCR与Western blot技术从受ISRE正向调控基因的转录水平与蛋白表达层面验证了筛选出的单体化合物能够促使ISRE的表达。结论成功构建能够高效检测ISRE活性的报告基因系统,利用该系统成功筛选出能促使ISRE表达的清肺口服液黄酮类化合物,具有一定的理论与应用价值。

关 键 词：清肺口服液 黄酮类化合物 ISRE 报告基因系统 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]