大鼠CaM(nNOS)-pGEX-4T-1原核表达载体构建及蛋白表达  

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作  者:孟利 杜彩萍 

机构地区:[1]徐州医科大学,江苏省脑病生物信息重点实验室,生物化学与分子生物学研究中心,江苏徐州221004

出  处:《中国科技纵横》2022年第24期123-125,共3页China Science & Technology Overview

基  金:江苏省高等学校自然科学研究重大项目(20KJA310010);国家自然科学基金项目(81100852)。

摘  要:构建CaM(nNOS)-pGEX-4T-1原核表达载体,转化于大肠杆菌BL-21细胞,并诱导蛋白的表达。以全长nNOS-pME18S重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1;将重组成功的重组子CaM(nNOS)-pGEX-4T-1转化入BL-21细胞,加入诱导剂IPTG诱导CaM(nNOS)蛋白的表达,用SDS-PAGE及免疫印迹方法鉴定CaM(nNOS)的表达。CaM(nNOS)-pGEX-4T-1表达载体成功构建。在诱导温度为16℃,IPTG为0.5mmol/L条件下,诱导时间为20h,可在大肠杆菌中大量表达CaM。重组CaM(nNOS)-pGEX-4T-1原核表达载体成功构建,蛋白表达成功。

关 键 词:钙调素结合区 原核表达载体 蛋白诱导表达 神经型一氧化氮合酶 

分 类 号:R916[医药卫生—药学]

 

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