PMA-qPCR方法快速检测细菌性果斑病菌活菌的研究  

Quantitative PCR combined with PMA treatment for real-time and rapid determination of viable Acidovorax citrulli

作　　者：郝芳敏 丁伟红 马二磊 严蕾艳 黄芸萍 王毓洪 臧全宇 HAO Fangmin;DING Weihong;MA Erlei

机构地区：[1]宁波市农业科学研究院宁波瓜菜育种重点实验室,浙江宁波315040

出　　处：《浙江农业科学》2023年第3期664-669,共6页Journal of Zhejiang Agricultural Sciences

基　　金：宁波市农业科学研究院瓜菜良种良法创新工程项目-瓜类健康种子生产及采后加工检测技术研究(2019CXGC002);浙江省西甜瓜良种育繁推科技创新平台(ZJ2019-80);国家西甜瓜产业技术体系(nycytx-36);宁波市瓜菜育种重点实验室(2014A22007)。

摘　　要：本文将叠氮溴化丙锭(PMA)与qPCR技术相结合,建立了一种适于细菌性果斑病菌株活细胞快速检测的PMA-qPCR方法。通过试验控制单因素变化,对PMA预处理反应体系中的各参数进行优化,确立了PMA终浓度为9μg·mL^(-1),曝光时间为8 min的PMA预处理体系,能有效抑制1.0×10^(7)mL^(-1)灭活死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在2.0×10^(1)~2.0×10^(6)mL^(-1),qPCR反应体系中活菌数与Ct值呈线性相关(R^(2)=0.9827)。本文建立的PMA-qPCR方法可在一定范围内有效去除细菌性果斑病死菌的干扰,定量检测出活菌数量,研究结果可为植物细菌性果斑病的流行规律研究提供新的技术支撑,并能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。

关 键 词：细菌性果斑病菌 叠氮溴化丙锭 活菌检测 快速检测 

分 类 号：S652[农业科学—果树学]