BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡颗粒细胞功能的研究  

作　　者：成颖 王锴[1] 张雅琦 吕丽华 

机构地区：[1]山西农业大学动物科学学院,山西太谷030801

出　　处：《中国畜牧杂志》2023年第3期203-211,共9页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：青年三晋学者专项;山西省基础研究计划项目(面上项目:20210302123393);大同市重点研发计划项目(农业,2021027);“1331工程”重点学科建设专项。

摘　　要：本实验旨在探究牛卵泡颗粒细胞(Granulosa Cells,GCs)bta-miR-2285bc与BMPR2的靶标关系,及其作为BMP15下游关键因子对GCs增殖和卵泡发育的潜在调控作用。利用miRanda预测bta-miR-2285bc与BMPR2 3’UTR的结合位点,构建BMPR2 3’UTR野生型与突变型双荧光报告载体,并通过双荧光素酶报告试验验证其靶标关系;屠宰场获取牛卵巢并于实验室分离直径4~8 mm卵泡,刮取卵泡壁GCs进行体外培养。设置浓度梯度,根据BMPR2表达量确定BMP15最适添加浓度。转染bta-miR-2285bc mimics/inhibitor至GCs并添加BMP15,qRT-PCR和Western blotting分别检测BMPR2 mRNA和蛋白表达,随后qRT-PCR检测GCs BMP/Smad信号通路、增殖、凋亡和类固醇激素合成相关基因表达水平,Elisa检测细胞培养液中雌激素(E2)和孕激素(P4)浓度。结果显示:bta-miR-2285bc能够靶向结合BMPR2 3’UTR;向体外培养的GCs添加最适浓度BMP15(100ng/mL)并转染bta-miR-2285bcmimics时,BMP/Smad信号通路相关基因Smad1、Smad5、Smad9和Smad4表达量下降(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND2表达量下降(P<0.05);细胞凋亡相关基因BAX和Caspase3表达量上升(P<0.05);抑凋亡基因BCL2表达量下降(P<0.01);类固醇激素合成相关基因CYP11A1、CYP19A1、HSD3B1和STAR表达量下降(P<0.05);GCs培养液中E2和P4浓度下调(P<0.05)。转染bta-miR-2285bc inhibitor得到与上述相反的实验结果。综上,BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡GCsBMP/Smad信号通路、细胞增殖、细胞凋亡和类固醇激素合成相关基因的表达,调控类固醇激素的合成,进而可能影响GCs增殖和卵泡发育。

关 键 词：牛 卵泡颗粒细胞 BMPR2 bta-miR-2285bc 类固醇激素 

分 类 号：S823.2[农业科学—畜牧学]