Bdnf基因过表达慢病毒载体的构建及表达  

Construction and expression of BDNF gene overexpression

作　　者：钟锦 史晋朝 张倩[1] 孟金凤 张倩倩 李建国[1] ZHONG Jin;SHI Jin-chao;ZHANG Qian;MENG Jin-feng;ZHANG Qian-qian;LI Jian-guo

机构地区：[1]山西医科大学生理学系,细胞生理学教育部重点实验室,太原030001

出　　处：《中国应用生理学杂志》2022年第5期397-400,共4页Chinese Journal of Applied Physiology

基　　金：山西省基础研究计划面上项目(20210302123305)。

摘　　要：目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因过表达慢病毒载体的构建和包装,检测其在大鼠海马原代神经元中的表达。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增Bdnf基因的exons4和CDS序列,将其克隆到pcDNA3.1-mCherry载体上,构建pcDNA3.1-exons4-Bdnf-mCherry慢病毒表达载体。重组质粒经KpnI和EcoRI双酶切鉴定和测序验证。使用三质粒包装系统将重组质粒pcDNA3.1-exons4-Bdnf-mCherry和慢病毒辅助包装质粒pMDLg/pRRE、pRSV-Rev和pCMV-VSV-G共转染293T细胞,制备并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代海马神经元,荧光显微镜和实时荧光定量PCR检测目的基因在原代海马神经元中的表达。结果:成功构建pcDNA3.1-exons4-Bdbf-mCherry慢病毒过表达载体,转染后的293T细胞表达红色荧光,并在培养大鼠海马原代神经元中表达增加(P<0.05)。结论:成功构建含有特定转录本的Bdnf基因过表达慢病毒载体,为进一步深入研究Bdnf的作用提供技术基础。

关 键 词：脑源性神经营养因子 慢病毒 293T细胞 原代海马神经元 基因表达 细胞培养 

分 类 号：Q189[生物学—神经生物学]