犬癌胚抗原免疫梳检测方法的建立  

作　　者：邓波 陶田谷晟[2] 丰东升 宋宇迎 周雨璊 杨显超[2] 张维谊 

机构地区：[1]上海市农产品质量安全中心,上海201708 [2]上海市动物疫病预防控制中心,上海201103

出　　处：《上海畜牧兽医通讯》2023年第2期24-30,共7页Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine

基　　金：上海市科技兴农项目(沪农青字[2018]第2-4号)。

摘　　要：为建立一种犬癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫梳检测方法,将包被鼠抗CEA捕获抗体固定于硝酸纤维膜(nitrocellulose filter membrane,NC膜)上,筛选出合适的包被液、包被温度、封闭液、封闭条件、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记抗体反应条件等,制备免疫梳。对建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验,并采用化学发光法和所建立的免疫梳检测方法对10份患恶性乳腺肿瘤病犬只的血清样品进行检测。优化条件:CEA捕获抗体质量浓度为100μg/mL,HRP标记抗体按1∶400(体积比)稀释,包被液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),包被温度为37℃,封闭液为3%BSA-PBS[含3%(质量分数)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)],封闭条件为4℃过夜,HRP标记抗体反应条件为37℃孵育1 h。建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法中CEA最低检出限为5 ng/mL,同时肿瘤标志物角蛋白8抗原、甲胎蛋白和前列腺抗原的检测结果均为阴性,重复性和稳定性良好;临床血清样品的免疫梳检测结果与化学发光法检测结果一致。研究结果表明:所建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法,可用于犬肿瘤疾病的初步诊断。

关 键 词：犬 癌胚抗原 包被 免疫梳 诊断 

分 类 号：S858.292[农业科学—临床兽医学]