金银花炭疽病病原菌的分离鉴定和qPCR检测  

作　　者：朱桐杉 谭晴晴[2] 刘国霞[2] 步迅[2] 张全芳[2] 张永清[1] 

机构地区：[1]山东中医药大学药学院,山东济南250355 [2]山东省农业科学院农作物种质资源研究所,山东济南250100

出　　处：《中药材》2022年第11期2556-2561,共6页Journal of Chinese Medicinal Materials

基　　金：山东省高校中药质量控制与全产业链建设协同创新中心项目(CYLXTCX2021-06);山东省创新公共服务平台计划中药分子鉴定公共服务平台项目(2018JGX111)。

摘　　要：目的:分离鉴定金银花炭疽病病原菌,并建立该病原菌的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系。方法:采集金银花炭疽病病叶标本,对病原菌进行分离和纯化,利用柯赫氏法则检测病原菌的致病性,通过形态学观察结合分子生物学分析鉴定病原菌;基于病原菌的ITS序列设计特异引物和TaqMan荧光探针,并基于该病原菌特异引物的扩增产物制备重组质粒标准品,利用标准品DNA构建qPCR的标准曲线;并对建立的qPCR方法进行特异性、灵敏度和实际样本验证。结果:明确从金银花炭疽病病叶片中分离纯化的菌株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。建立的qPCR快速检测方法能够特异性检测该病原菌,灵敏度高,最低检测限为2.94×10^(2)copies/μL,比常规PCR检测灵敏度提高100倍。实际样本验证结果显示,在20例金银花病叶中,4例为炭疽病阳性,与DNA测序结果相符。结论:本研究明确胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides为金银花炭疽病的病原菌,所建立的qPCR方法能对金银花炭疽病进行快速、准确的检测,可以为该病害的早期防治提供技术支持。

关 键 词：金银花 炭疽病 鉴定 实时荧光定量PCR 

分 类 号：S432.4[农业科学—植物病理学]