噬菌体展示技术筛选猪小肠上皮细胞穿透肽  

作　　者：刘思佳 徐晓东 姜宁[1] 潘春媛[1] 宋军 赵磊 赵芳芳[1] 李沐阳 张爱忠[1] 

机构地区：[1]黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江省寒区饲料资源高效利用与营养调控重点实验室,农业农村部东北平原农业绿色低碳重点实验室,黑龙江大庆163319

出　　处：《中国畜牧杂志》2023年第8期351-356,共6页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家自然科学基金项目(32072759);黑龙江省肉羊协同创新与推广体系专项。

摘　　要：为辅助抗菌药物进入动物细胞杀伤胞内致病菌,本试验利用噬菌体展示技术筛选猪小肠上皮细胞的穿透肽。通过噬菌体展示技术进行4轮体外生物淘洗,得到与猪小肠上皮细胞结合的多肽;经过4轮减数筛选,噬菌体回收率逐渐提高,酶联免疫吸附法(ELISA)测定单克隆噬菌体对猪小肠上皮细胞的亲和力,亲和力≥2的为阳性,将阳性噬菌体克隆提取DNA,将高重复率序列合成细胞穿透肽,同时合成与其氨基酸序列及结构相同但组合顺序不同的对照多肽,荧光FITC标签连接。检测多肽的抑菌活性、溶血活性和细胞毒性,荧光显微镜观察穿透肽的穿透性、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测穿透肽在胞内的定位及强度。结果表明:4轮筛选噬菌体的回收率增长283倍;ELISA检测显示,随机挑选30个单克隆噬菌体,17个为阳性克隆;DNA测序得到2条高重复序列,SAYKMMA命名ICPP1和SSSISGL命名ICPP2;穿透肽及对照多肽无抑菌活性,溶血性较好,安全无毒对细胞活力无影响;荧光显微镜观察及激光共聚焦结果表明,ICPP1和ICPP2可穿透猪小肠上皮细胞膜,且ICPP1表现出更强的穿透性;流式细胞仪结果显示,ICPP1的胞内平均荧光强度明显高于ICPP2,且呈时间剂量依赖,有较好的热稳定性和较低的血清稳定性。本试验筛选出了安全可穿透猪小肠上皮细胞的穿透肽(ICPP1),可作为治疗猪肠道胞内菌的抗菌肽的载体。

关 键 词：噬菌体展示技术 肽库 猪小肠上皮细胞 细胞穿透肽 

分 类 号：S828.5[农业科学—畜牧学]