基于NF-κB信号通路的HTRF法筛选红豆杉中抗气道炎症有效活性成分研究  

Study Based on NF-kB Signaling Pathway Screening of Anti Airway Inflammation Active Components in Taxus Chinensis Using HTRF

作　　者：王楠楠 蔡婷婷[1,2] 童晔玲 刘霞[1,2,3] 朱婉萍 江石平[1] 赵桂芝 WANG Nannan;CAI Tingting;TONG Yeling

机构地区：[1]浙江省中医药研究院,浙江杭州310007 [2]浙江省中药药效物质基础研究中医药重点实验室,浙江杭州310007 [3]浙江省中药新药研发重点实验室,浙江杭州310007

出　　处：《浙江中医杂志》2023年第8期553-556,共4页Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine

基　　金：浙江省基础公益研究计划项目基于NF-κB信号通路的HTRF对红豆杉中抗气道炎症物质基础的应用研究,编号:LGC20H280001。

摘　　要：目的:运用均相时间分辨荧光(HTRF)检测方法,建立快速、稳定、高通量的抗炎药物细胞筛选模型,研究红豆杉中抗气道炎症有效活性成分。方法:采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β(IL-1β)诱导支气管上皮细胞(HBE)建立炎症细胞模型,HTRF法检测细胞中Total核转录因子-κB(NF-κB)及Phospho NF-κB表达情况。通过考察不同细胞密度(10、25、50k/孔)、刺激时间(5、10、20、30、60、120、240min)及刺激浓度对NF-κB磷酸化的影响,筛选出最佳气道炎症细胞模型。同时给予红豆杉不同提取物孵育后,观察其对NF-κB磷酸化的影响。结果:TNF-α及IL-1β均能够诱导HBE中NF-κB发生明显磷酸化,其中TNF-α EC50为0.41ng/mL,IL-1β EC50为5.69ng/mL;当细胞密度在10~25k/孔,刺激时间在5~30min时,磷酸化水平较高。红豆杉紫杉烷类及挥发油类成分能够降低细胞中NF-κB磷酸化水平。结论:成功建立了快速、稳定、高通量的抗气道炎症药物细胞筛选模型,红豆杉紫杉烷类及挥发油类成分有明显的抗气道炎症作用,具有较好的开发价值和应用前景。

关 键 词：红豆杉 均相时间分辨荧光 抗气道炎症 NF-ΚB 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]