坦布苏病毒RNA复制子系统的构建与应用  

Construction and application of Tembusu virus JXSP strain RNA replicon system

作　　者：章丽娇 赵冬敏[1,2] 韩凯凯 黄欣梅[1,2] 杨婧 吴凤瑶[1,2] 刘青涛 刘宇卓[1,2] 张小飞 李银 Zhang Lijiao

机构地区：[1]江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014 [2]兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,江苏泰州225300

出　　处：《江苏农业科学》2023年第19期153-157,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(21)3134];国家自然科学基金(编号:31802200)。

摘　　要：黄病毒RNA复制子在病毒致病机制、新型疫苗和药物研发上应用广泛,而坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)是我国新发现的以引起水禽产蛋量下降为主要特征的黄病毒属成员。为构建TMUV RNA复制子,本研究以TMUV JXSP株感染性克隆为基础,利用Overlap PCR分别对病毒基因组进行CPrME、CPrM、PrME和PrM等4种方式结构蛋白基因的缺失,并在缺失部位插入绿色荧光蛋白报告基因,报告基因下游连接口蹄疫病毒2A蛋白基因序列,获得的基因组全长PCR融合产物纯化后,体外转录成mRNA,并转染至BHK-21细胞,采用荧光显微镜观察不同时间点绿色荧光蛋白的表达;利用构建的TMUV RNA复制子,将绿色荧光蛋白基因替换为H9亚型禽流感病毒HA基因,mRNA转染细胞72 h后Western blotting检测蛋白表达。结果显示,4种TMUV RNA复制子转染细胞的胞浆和胞核内均能观察到明显的绿色荧光信号;Western blotting能检测到HA蛋白的表达。结果表明,本研究成功构建了ΔCPrME、ΔCPrM、ΔPrME和ΔPrM等4种能有效表达外源基因的TMUV RNA复制子。

关 键 词：坦布苏病毒 复制子 RNA 转录 蛋白表达 转染 

分 类 号：S852.657[农业科学—基础兽医学]