柑橘黄脉病毒一步法RT-PCR快速检测技术探究  

Study on rapid detection of citrus yellow vein clearing virus by one-step RT-PCR

作　　者：刘顺民 杜丹超[1] 蒲占湑[1] 朱莉 张利平[1] 吕佳[1] 黄振东[1] 陈国庆[1] 鹿连明[1] LIU Shunmin;DU Danchao;PU Zhanxu

机构地区：[1]浙江省农业科学院浙江省柑橘研究所,浙江台州318020

出　　处：《浙江农业科学》2023年第11期2742-2748,共7页Journal of Zhejiang Agricultural Sciences

基　　金：台州市科技计划(20ny14);浙江省农业科学院专项经费项目(发展建设类)(2023R27CB001);浙江省科技计划(2023C02057)。

摘　　要：本研究通过对柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的三基因盒基因、病毒外壳蛋白基因及23 K基因序列分析并设计出7对引物,对引物特异性和灵敏度进行比较,筛选出能够应用于实验室一步法RT-PCR快速检测CYVCV的引物,由此建立起针对CYVCV一步法RT-PCR快速检测体系。结果表明:引物对TGB1-F/R能从柑橘总RNA稀释160000倍(0.004 ng·μL^(-1))的稀释液中检测出CYVCV,利用该体系对607份田间随机样品进行检测,CYVCV的感染率为10.05%,说明该体系可靠稳定,适用于实验室里的大量检测;一步法RT-PCR获得CYVCV的TGB1、TGB2、TGB3、CP和23 K的特异性片段,片段序列长度分别为678、327、183、978和669 bp,通过克隆和测序结果比对显示,各片段与已报道的CYVCV病毒序列具有较高的同源性,同源性均在99%以上。

关 键 词：柑橘黄脉病毒 一步法RT-PCR 快速检测 

分 类 号：S436.66[农业科学—农业昆虫与害虫防治]