二草清肝汤含药血清对人源HL-7702肝细胞凋亡的影响及其机制研究  

Effect and Mechanism of Ercao Qinggan Decoction Containing Serum on Apoptosis of Human HL-7702 Hepatocytes

作　　者：黄健莹 欧阳钦[1] 吴春明[1] 刘三海 王丽佳 赵安静 谢远太 HUANG Jiangying;OUYANG Qin;WU Chunming

机构地区：[1]浙江中医药大学附属温州市中医院,浙江温州325000

出　　处：《浙江中医杂志》2023年第11期788-791,共4页Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine

基　　金：浙江省基础公益研究计划项目TLR4介导的信号通路对肝细胞凋亡的影响及二草清肝汤的干预机制研究,编号:LGF21H270001;浙江省中西医结合学会临床药学科研专项二草清肝汤对内毒素性肝损害模型小鼠肝脏Kupffer细胞Toll样受体4信号通路的影响,编号:2019LY013;温州市基础性科研项目二草清肝汤对RAW264.7细胞凋亡的影响及其机制研究,编号:Y20210149。

摘　　要：目的:探究二草清肝汤(EQD)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:制备急性肝衰竭小鼠模型,分组后分别对各组小鼠以相应剂量EQD和生理盐水进行灌胃,末次注射LPS 24h后,提取含药血清备用;采用LPS诱导人源HL-7702肝细胞建立细胞凋亡模型,随机分为空白对照组、LPS组、LPS+EQD低剂量组、LPS+EQD中剂量组、LPS+EQD高剂量组,分别采用相应剂量的含药血清100μL预处理2h后,然后再加入10μg/mL的10μL LPS处理24h,空白对照组予相同剂量的生理盐水。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察GSK3β核易位情况,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测兔抗人单克隆抗体(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,Western-blot法检测HL-7702细胞内AKT、p-AKTS、GSK3β、p-GSK3β的表达。结果:与空白对照组比较,LPS处理后,HL-7702凋亡率显著上升(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,结果显著下降(P<0.05)。免疫荧光检测显示,GSK3β主要在HL-7702细胞质表达;与空白对照组比较,LPS处理后,HL-7702中GSK3β表达显著上升,且趋向于向细胞核中聚集(P<0.05);经低、中、高EQD分别处理后,表达显著下降且趋向于向细胞质中聚集(P<0.05)。qPCR检测显示,与对照组比较,LPS处理后,HL-7702细胞中Bax、TNF-α、IL-6显著上升,Bcl-2表达显著下降(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,前者显著下降,后者显著上升(P<0.05)。Western-blot检测显示,与对照组相比,LPS处理后,AKT、GSK3β、p-AKT、p-GSK3β表达显著上升(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,AKT、GSK3β表达显著上升(P<0.05),其余表达显著下降(P<0.05)。结论:EQD预处理可以显著降低LPS诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡率,其机制可能与抑制TLR4/PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。

关 键 词：二草清肝汤 肝细胞凋亡 TLR4 内毒素 PI3K/AKT/GSK3β信号通路 

分 类 号：R285[医药卫生—中药学]