肿瘤恶病质肌管萎缩细胞模型构建及六君子汤对其改善机制研究  

作　　者：郝羚伦 张艳[2] 彭梦薇 桑亚洲 陈玉龙[1] 刘燕[1] 吴耀松[1] 

机构地区：[1]河南中医药大学中医药科学院,河南省中医方证信号传导重点实验室/河南省中医方证信号传导国际联合重点实验室,河南郑州450046 [2]天津中医药大学,天津301617 [3]华中科技大学,湖北武汉430074

出　　处：《时珍国医国药》2023年第10期2538-2541,共4页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(82074313);河南省科技厅河南省科技攻关项目(192102310160);河南省高等学校重点科研项目(23A360024)。

摘　　要：目的 建立肿瘤恶病质肌管萎缩细胞模型,探讨六君子汤在体外对该模型的改善作用,为阐明六君子汤抗肿瘤恶病质肌肉萎缩的分子机制提供依据。方法 诱导成肌细胞C2C12分化,倒置显微镜观察分化后肌管长度;小鼠肺癌细胞(Lewis细胞)与C2C12细胞共培养,免疫荧光法检测C2C12细胞中肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MyHC)的荧光表达;MTT比色法检测六君子汤、叉头转录因子-1(Forkhead Box O1,FoxO1)抑制剂对两种细胞增殖影响;将共培养的C2C12细胞与Lewis细胞分为空白组、模型组、六君子汤组、抑制剂组(FoxO1抑制剂)、联合用药组(六君子汤联合FoxO1抑制剂),酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent Assay, ELISA)检测各组上清转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量;倒置显微镜观测各组C2C12细胞肌管变化;蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测各组C2C12细胞MyHC蛋白表达;透射电子显微镜观察各组C2C12细胞自噬体数量。结果 实验发现,C2C12细胞于分化48h肌管横径最长;与空白组比,模型组C2C12细胞MyHC的荧光表达明显降低(P<0.05),药物浓度以六君子汤100g/mL、FoxO1抑制剂1μmol/L为宜;与空白组比,模型组上清TGF-β1含量显著上升(P<0.05),C2C12细胞肌管长度减少(P<0.05),MyHC蛋白表达降低(P<0.05),自噬体数量增多(P<0.05);与模型组比,六君子汤组、抑制剂组、联合用药组TGF-β1含量下降(P<0.05),C2C12细胞肌管长度增加(P<0.05),MyHC蛋白表达增高(P<0.05),自噬体数量减少(P<0.05);与六君子汤组比,抑制剂组TGF-β1含量升高(P<0.05)。结论 诱导分化的成肌细胞C2C12与肺癌细胞Lewis共培养可构建肿瘤恶病质肌管萎缩模型,健脾和胃法的代表方六君子汤可以显著降低肌管萎缩模型上清TGF-β1含量、提高MyHC蛋白表达、减少自噬体数量,改善因肿瘤细胞环境下引起的肌管萎缩。

关 键 词：肿瘤恶病质 肌管萎缩 模型构建 六君子汤 

分 类 号：R2-03[医药卫生—中医学] R285.5