乙型脑炎病毒微滴式数字 PCR检测方法的建立及初步应用  

Development and preliminary application of a microtitre digital PCR assay for Japanese encephalitis virus

作　　者：阚乃鹏 王金章[1] 骆婧[1] 杨劲松[1] KAN Naipeng;WANG Jinzhang;LUO Jing

机构地区：[1]福建省疾病预防控制中心(福建省人兽共患病研究重点实验室),福建福州350012 [2]福建师范大学生命科学学院,福建福州350108

出　　处：《海峡预防医学杂志》2023年第4期56-59,共4页Strait Journal of Preventive Medicine

基　　金：福建省卫生健康科技计划项目(2020QNA021);福建省自然科学基金面上项目(2022J01399)。

摘　　要：目的 建立微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,用于乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的核酸检测。方法 设计特异性扩增JEV的引物探针并优化条件建立ddPCR检测方法,检测其他病毒核酸,观察有无交叉反应判断其特异性。用实时荧光定量PCR(qPCR)与ddPCR法分别对梯度稀释后JEV体外转录核酸进行检测以评价方法的敏感性;用不同浓度的病毒核酸进行独立重复实验以评价方法的重复性;用乙型脑炎IgM抗体阳性标本评价临床标本,健康人血清用于阴性验证。结果 本法检测与其他病毒核酸无交叉反应;RT-qPCR和RT-ddPCR方法对JEV的最低检出限分别为10^(0)和10^(-1),对应分别为6.73 copies/μL和0.75 copies/μL;各浓度检测拷贝数变异系数均在2.0%以下,检出率为100.0%;12份乙型脑炎IgM抗体阳性标本中检出7份阳性(58.3%),健康人血清的阴性率为100.0%。结论 本研究建立的RT-ddPCR检测JEV方法有较好的特异性、敏感性、重复性和临床标本适应性,可作为乙型脑炎病原学监测的一种技术手段。

关 键 词：乙型脑炎病毒(JEV) 微滴式数字PCR(ddPCR) 实时荧光定量PCR(qPCR) 病原学监测 

分 类 号：R373.3[医药卫生—病原生物学]