基于“瘀毒互结”探讨通窍活血汤加减介导PI3K/AKT/mTOR信号通路干预脑缺血再灌注损伤神经细胞自噬  

作　　者：刘祎 刘旺华[1,2,3] 李花[1,3] 宋旭东 

机构地区：[1]湖南中医药大学中医学国内一流建设学科,湖南长沙410208 [2]湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙410208 [3]湖南中医药大学中医心肺病证辨证与药膳食疗重点研究室,湖南长沙410208

出　　处：《时珍国医国药》2023年第11期2580-2584,共5页Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

基　　金：国家自然科学基金(81473567);湖南省自然科学基金(2023JJ30451);湖南省中医药科研计划重点项目(2021013、A2023038);湖南省高校创新平台开放基金(20K097)。

摘　　要：目的从“瘀毒互结”出发,探讨通窍活血汤加减通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路干预自噬抗脑缺血再灌注损伤机理。方法SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、通窍活血汤加减组、雷帕霉素组和通窍活血汤加减+雷帕霉素组。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,于缺血后2 h进行再灌注,连续治疗7 d。观察大鼠的一般宏观症状,并进行1,3,5和7 d的神经功能缺损评分(m-NSS),半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor-Alpha,TNF-α)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和谷氨酸(Glutamic Acid,GLU)含量,HE染色法观察病理组织形态,Western blot检测Beclin1、PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测LC3和Beclin1 mRNA的表达。结果与假手术组相比,模型组宏观症状较差,形体偏瘦,体重在180~240 g之间,唇舌颜色暗红,舌体歪斜,重者抽搐,意识不清,毛发较干枯,耳廓可见暗红色溃疡,性情暴躁,大便稀溏,尿量少,尿黄,纳差,爬行倾向左侧且向左侧追尾,1,3,5,7 d的m-NSS评分均显著增加(P<0.01),大鼠皮质组织结构异常,细胞间隙增宽,周围空泡多,多呈点状坏死,细胞排列紊乱,细胞核明显破碎、固缩、深染,TNF-α、MDA和GLU血清含量明显增加(P<0.01,P<0.05),Beclin1蛋白表达水平明显上调(P<0.01),PDK1、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平均明显下调(P<0.01),LC3、Beclin1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,通窍活血汤加减组大鼠宏观症状较好转,体重在220~260 g之间,耳廓溃疡较好转,性情略暴躁,大便仍稀溏,小便黄,纳一般,爬行稍倾向左侧,行动相对较便利,3,5,7 d的m-NSS评分均显著降低(P<0.01,P<0.05),大鼠皮质组织中完整神经细胞数有所减少,细胞间隙稍宽,排列略紊乱,细胞皱缩和胞核固缩浓染程度较模型组�

关 键 词：脑缺血再灌注 瘀毒互结 自噬 PI3K/AKT/MTOR 通窍活血汤 

分 类 号：R285.5[医药卫生—中药学]