H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的制备及鉴定  

作　　者：董楠 刘郁夫 杨小云 谭银娟 欧阳征亮 陈瑞爱 

机构地区：[1]农业农村部兽用生物制品工艺技术重点实验室广东省兽用生物制品技术研究与应用企业重点实验室肇庆大华农生物药品有限公司,广东肇庆526238 [2]华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司,广东肇庆526238 [3]肇庆学院生命科学学院,广东肇庆526060 [4]岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心,广东肇庆526238

出　　处：《养禽与禽病防治》2024年第3期11-18,共8页Poultry Husbandry and Disease Control

基　　金：广东省重点领域研发计划项目(2021B0707010009)。

摘　　要：为构建H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒,研制新型基因工程疫苗。利用杆状病毒一昆虫细胞表达系统,在Sf9细胞中共表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白。将H5亚型禽流感病毒的HA基因和M1基因分别克隆至pFastBac-dual载体PH和P10启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFastBac-H5-M1,再通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,将重组杆粒转染至昆虫细胞Sf9中,拯救重组杆状病毒,通过间接免疫荧光、westernblot试验鉴定是否表达特异性蛋白,最后在透射电镜下观察病毒样颗粒的形态。重组H5亚型禽流感病毒HA基因和M1基因的杆状病毒,在Sf9细胞中盲传3代后,可在显微镜下观察到杆状病毒感染引起的细胞肿胀破裂等细胞病变;通过间接免疫荧光试验可观察到细胞内绿色荧光信号,证明重组杆状病毒拯救成功;westernblots试验结果显示Sf9细胞中可检测到HA蛋白和M1蛋白,目的条带大小分别为70ku和25ku左右,与预期相符,并且均以分泌上清的形式表达;通过透射电镜可在Sf9细胞上清中观察到与流感病毒结构类似的颗粒。本研究成功构建共表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白的重组杆状病毒,该重组杆状病毒可在Sf9昆虫细胞中组装成与天然流感病毒粒子结构相似的颗粒样物质。

关 键 词：H5亚型 禽流感病毒 杆状病毒 病毒样颗粒 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]