黄瓜单性结实果实酵母双杂交文库的构建及CsCML25互作蛋白的筛选  

作　　者：徐建 姚协丰[1] 娄丽娜[1] 朱凌丽[1] 张曼[1] 羊杏平[1] 徐锦华[1] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院蔬菜研究所,江苏南京210014

出　　处：《种子科技》2024年第7期1-4,共4页Seed Science & Technology

基　　金：江苏省自然科学基金(BK20190263);国家西甜瓜产业技术体系项目(CARS-25);江苏现代农业(西甜瓜)产业技术体系项目(JATS[2023]385)。

摘　　要：为研究黄瓜单性结实形成的分子调控机制,以黄瓜单性结实自交系‘EC1’为材料,分别取开花前1 d至开花后4 d的子房,提取RNA后等量混合,采用SMART方法构建酵母双杂cDNA文库。结果表明,构建的文库总克隆数为1.16×107 CFU,平均插入片段长度≥1000 bp,阳性率为100%,符合建库的标准,可用于后续的酵母双杂交筛选。以黄瓜单性结实关键调控因子CsCML25为诱饵,构建pGBKT7-CML25诱饵蛋白表达载体,经自激活活性分析及不同浓度3AT对诱饵蛋白自激活活性抑制效果分析,使用SD-TLH+20 mM 3AT平板可完全抑制诱饵蛋白自激活活性。利用酵母双杂交筛选构建的黄瓜单性结实果实cDNA文库,得到96个初始阳性克隆。利用DNA测序、BLAST分析以及酵母回转验证等方法,最终获得27个可能与CsCML25相互作用的候选蛋白,为从分子水平探究CsCML25调控黄瓜单性结实的机制提供了理论基础。

关 键 词：黄瓜 单性结实 CDNA文库 酵母双杂交 CsCML25 

分 类 号：S642.2[农业科学—蔬菜学]