绵羊手工克隆关键技术流程优化  

作　　者：李伟建 李卓 赵茜[1] 艾日夏提·地里夏提 刘娅兰 马秀玲 王莉 王旭光[1] 

机构地区：[1]新疆农业大学动物科学学院,新疆乌鲁木齐830052

出　　处：《中国畜牧杂志》2024年第3期231-234,317,共5页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2020D01A56)。

摘　　要：手工克隆技术(Handmade Cloning,HMC)是一种不需要显微操作仪的更为方便的克隆方法,但是其对于操作人员的要求更加严格。本文着重于对透明带消化时间、融合时间、供核类型、代数、饥饿与否几个关键节点进行优化。结果表明:链霉蛋白酶消化时间在70~105 s之间死亡率极显著低于处理时间大于105 s组(3.1%vs. 25.1%),胞质碎裂率极显著低于处理时间小于75 s组(2.1%vs. 72.0%)。另外,供核细胞为P0~P1代时,囊胚率极显著低于饥饿48h或0h的P2~P5代供核细胞(24%vs. 40.1%、39.8%)。在融合率方面,随着操作时间的加长,累加平均融合率呈现降低趋势。在供核的选择方面,使用脐带间充质干细胞获得的囊胚率极显著高于耳缘成纤维细胞(40.4%vs. 21.8%)。由此可见,绵羊HMC法克隆过程中,使用链酶蛋白酶处理75~105 s,融合时间控制在115 min之内,使用代数大于P2的间充质干细胞能够获得较高的囊胚率。

关 键 词：绵羊 体细胞核移植 手工克隆 链霉蛋白酶 脐带间充质干细胞 

分 类 号：S826.3[农业科学—畜牧学]