山羊原代软骨细胞的分离培养与鉴定研究  

作　　者：陈子同 徐小丽 徐亮 陈欢 李利[1] 张红平[1] 曹家雪 

机构地区：[1]四川农业大学动物科技学院,四川成都611130

出　　处：《中国畜牧杂志》2024年第4期197-201,206,共6页Chinese Journal of Animal Science

基　　金：国家自然科学基金(31802048);四川省自然科学基金(2022NSFSC1611);四川省归国人员科技择优资助(2021-22)。

摘　　要：为探究山羊原代软骨细胞的体外分离培养和鉴定方法,本实验采用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶相结合的消化方法分离山羊原代软骨细胞。使用倒置显微镜观察并拍摄1、3、5、7 d共4个时期的细胞形态;利用血球计数板对细胞计数并绘制生长曲线;RT-qPCR法检测山羊软骨细胞标志性基因;通过甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫荧光染色法对软骨细胞进行鉴定。结果显示:细胞形态由透亮的圆点逐渐变为三角形、短梭形等形态,最终转变为体积较大,形态圆润的多边形;细胞计数结果显示,1~7 d细胞数量逐渐增加,7 d达到峰值,7~11d细胞数量逐渐减少。Acan和Col Ⅱ基因mRNA相对表达量随细胞培养时间的延长而降低,MMP13基因mRNA相对表达量逐渐升高。甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色结果均为阳性。由以上结果可知,本实验成功获得大量活力良好的山羊软骨细胞,并建立山羊软骨细胞体外分离及培养的方法,为进一步研究山羊软骨相关体外试验提供参考。

关 键 词：软骨细胞 Acan ColⅡ MMP13 体外培养 

分 类 号：S827.1[农业科学—畜牧学]