实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立及初步应用  

作　　者：袁朝霞[1] 刘湘 王友令 刘兆洁 梁昭平[4] 吴晓薇 曾小辉 蔡广娣 熊金光 

机构地区：[1]仲恺农业工程学院,广州510225 [2]广州达农生物科技有限公司,广州510665 [3]广东省华晟生物技术有限公司,广州511300 [4]华南农业大学兽医学院,广州510642 [5]广州海关技术中心,广州510623

出　　处：《养禽与禽病防治》2024年第6期2-7,共6页Poultry Husbandry and Disease Control

摘　　要：研究旨在建立一种检测鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)的实时荧光定量TaqManRT-PCR检测方法。制备含有DTMUV目的基因的标准质粒,以10倍比稀释的DTMUV标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法仅在鸭坦布苏病毒RNA样本中检测出荧光信号。最低检出浓度为3.70×10^(2)copies/μL,敏感性良好,是常规RT-PCR的100倍;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.8%以下。经临床样品检测证实该法可用于DTMUV的临床鉴别诊断及流行病学调查,为该病的综合防控措施提供分子生物学参考依据。

关 键 词：鸭坦布苏病毒 实时荧光定量RT-PCR TAQMAN探针 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]